利用魚精蛋白與脂質製備基因載體應用於RNA傳遞

學生姓名: 李柔
指導教授: 蔡敏郎
學  號: 10432049
學期: 104下
  • 10432049-2-李柔-蔡敏郎.pdf
    小分子干擾RNA (small interfering RNA, siRNA)常用於RNA干擾(RNA interference, RNAi)作用,其可抑制或沉默(silencing)相同鹼基序列的mRNA (messenger RNA),阻止基因轉錄轉譯成蛋白質,利於治療基因缺陷所導致的疾病。由於RNA易被分解,故使用有助於DNA縮合(DNA condensation)的魚精蛋白(protamine)與RNAi干擾物包覆在三種不同型態的基因脂質載體,依序為DNA複合物(DNA-complex)、脂質奈米粒(lipid nanoparticles, LNP)與固體脂質奈米粒(solid lipid nanoparticles, SLNs),測試其體內或體外的基因沉默能力。在使用魚精蛋白、脂質與DNA複合載體時,在魚精蛋白/核酸比在0.6時可組裝出200 nm和低多分散性的帶正電顆粒,對細胞不具顯著毒性,並具有VEGFR-2沉默能力;於組裝LNP時粒徑測得435 nm,且對pH值具有敏感性的帶正電奈米載體,可誘導人類或小鼠細胞基因沉默率達70%,證實陽離子細胞穿透胜肽(cell-penetrating peptides)的修飾有助於增強LNP的B16F10細胞內化(internalization)及基因沉默率;組裝SLNs時,測得粒徑介於200-240 nm、帶正電奈米粒,並可保護shRNA免於酵素降解,細胞存活率可達90%,展現50%的基因沉默率。從三種不同型態的脂質與魚精蛋白基因載體,證實魚精蛋白可有效幫助脂質遞送RNA物質,以利於基因治療。