學生姓名:
林宜姍
指導教授:
方翠筠
學期:
105上
摘 要:
β-半乳糖苷酶 (β-galactosidase) 為一種糖苷外切酶,能夠水解 (hydrolysis)乳糖 (lactose) 生成葡萄糖 (glucose) 和半乳糖 (galactose);亦具有將半乳糖分子轉移至乳糖分子上,生成益生質 (prebiotic) 半乳寡醣 (galactooligosaccharides,GOS) 之活性,而本篇報告主要探討藉由固定化技術提升 β-半乳糖苷酶穩定性之可行性。首先利用微膠囊化技術將 β-半乳糖苷酶固定於修飾型幾丁聚糖上並探討其酵素特性與穩定性,固定後之 β-半乳糖苷酶在 4∘C 下儲存六個月後,其外觀特徵與六個月前無顯著性差異,KM 值僅小幅度上升,由 0.08 上升至 0.1119mM。β-半乳糖苷酶以共價鍵結方式,固定於經聚乙烯亞胺(polyethylenimine, PEI)或乙二胺 (ethylene diamine, EDA) 處理之新型接枝瓊脂盤上,其固定化之酵素活性約為未固定化之 3.44 倍;在重複使用性上,固定化酵素重複反應批次後,仍保留 92.99% 之酵素相對活性。以修飾化之聚苯乙烯奈米纖維(polystyrenenanofiber, PSNF) 固定化 β-半乳糖苷酶,其可反應之 pH 值提升至 10,使其在鹼性環境下亦可作用;可反應溫度自37∘C 提升 37 至 60∘C 間;經修飾後之NF 固定化酵素之 GOS 產率較未固定化酵素,由 19% 提升至 28%。綜合上述可知,可利用不同物質固定化 β-半乳糖苷酶,以達到酵素活性、pH 值、反應溫度或是重複使用性之提升。