探討胜肽及蛋白質水解物對腸上皮細胞受損之保護作用

學生姓名: 林麗安
指導教授: 黃意真
學期: 107上
摘　　要: 本報告目的為探討不同的胜肽及蛋白質水解物的抗氧化活性，並研究其對腸上皮細胞氧化損傷的保護作用。Lunasin 是大豆和其他植物中鑑定出的胜肽，研究其對過氧化氫 (H2O2) 和叔丁基過氧化氫 (t-BOOH) 攻擊的 Caco-2 細胞之細胞活力和抗氧化防禦的保護作用，該胜肽在與細胞培養期間保持部分完整，防止由兩種化學試劑誘導的氧化損傷，其對暴露於氧化物種的 Caco-2 細胞的直接抗氧化作用使得該胜肽可以保護腸上皮完整性以抵抗氧化損傷相關疾病。蛋殼膜蛋白水解產物由 Alcalase 和 Protease S (AL-PS) 製備，並以超濾膜區分為AL-PS-I、AL-PS-II 和 AL-PS-III 三種部分。使用化學測定法評估 AL-PS 水解產物的抗氧化活性，並使用人腸上皮 Caco-2 細胞研究其對氧化壓力的保護能力，結果發現 AL-PS-I (<5 kDa) 對 DPPH 和羥基自由基具有最高的清除活性；AL-PS-III (>10 kDa) 表現出最佳的亞鐵離子螯合活性。以 AL-PS 水解物預處理Caco-2 細胞，再以 H2O2 刺激後細胞中的 IL-8 分泌明顯受到抑制，且抗氧化劑穀胱甘肽 (Glutathione, GSH) 含量顯著增加。用 Alcalase 製備大豆蛋白水解物 (Soybean protein hydrolysate, SPH)，隨後超濾成四個胜肽部分 SPH-1、SPH-II、SPH-III 和 SPH-IV。SPH-I (<3 kDa) 表現出最強的 DPPH 自由基清除活性和還原能力，而 SPH-III (5-10kDa) 具有最佳的金屬離子螯合活性，SPH 和胜肽部分均能抑制 Caco-2 細胞中 H2O2 誘導的細胞內活性氧累積，但從 SPH-I 觀察到最強的抑制作用。另外，SPH-I 通過抑制脂質過氧化和刺激抗氧化酶活性來保護Caco-2 細胞免受氧化壓力。總之，上述胜肽及蛋白質水解物在體外細胞培養模型中都具有抗氧化活性，能保護 Caco-2 細胞免受 H2O2 誘導的氧化壓力，有助於保持腸上皮細胞對氧化損傷相關疾病的完整性。