以酵素輔助自龍鬚菜產出藻紅蛋白與藻藍蛋白及以藻渣產製洋菜混合寡醣之反應條件與其組成分析之探討

學生姓名: 陳巧芸
學期: 107下
摘　　要: 本篇報告主旨為研究以酵素輔助萃取和區分龍鬚菜之藻紅蛋白與藻藍蛋白，及利用所產藻渣生產洋菜混合寡醣之反應條件與組成分析。本實驗利用均質攪碎搭配超音波震盪，並以海洋菌株 Pseudomonas vesicularis MA103 與 Aeromonassalmonicida MAEF108 之粗酵素液自龍鬚菜溶液輔助萃取藻膽蛋白，經 15%MA103 + 15% MAEF108 (M3M8) 及 30% MA103 (M3) 粗酵素液水解 48 hr 之龍鬚菜酵素水解液的藻紅蛋白 (Phycoerythrins, PE) 螢光強度分別為 1,059,349AU (與控制組相比提高 15.2 倍) 和 1,159,307 AU (提高 17.8倍)，藻藍蛋白(Phycocyanins, PC) 螢光強度分別為 10,959 (提升 111%) 及 12,679 (提升155%)。將龍鬚菜酵素水解液進行快速蛋白液相層析 (Fast performance liquidchromatography, FPLC)，以第 17 個區分液對 565 nm 之 PE 特殊吸收波長強度較高，第 22 個區分液對 620 nm 之 PC 特殊吸收波長強度較高，進一步以高效液相層析 (High performance liquid chromatography, HPLC) 觀察到二者皆為單一波峰，M3M8 組別之龍鬚菜酵素水解液經區分後 PE 與 PC 純度為 1.75(A565/A280) 與 0.74 (A620/A280)，且產率為 0.59% 及 0.06%，而 M3 組別之 PE與 PC 純度為 1.60 與 0.67，產率為 0.47% 及 0.06%。自龍鬚菜藻渣萃取多醣液後，添加誘導產生之 MA103 與 MAEF108 洋菜酶粗酵素液水解，並利用超過濾系統 (Ultrafiltration, UF) 區分出小於 3 kDa 之龍鬚菜藻渣洋菜混合寡醣(GOS3K)，M3M8 及 M3 組別之龍鬚菜藻渣所得 GOS3K 產率分別為 0.62% 及0.66%，具有 DP 2、DP 4、DP 6 的寡醣分子，以 1,023 Da 之寡醣分子為主要醣類組成，推測為 DP 6，且 GOS3K 含有 C-O-S、C-O-H 與 C-C 等官能基結構。