學生姓名:
劉昕
指導教授:
張君如
學 號:
10832038
學期:
108上
摘 要:
本篇報告主要探討使用腸道 Caco-2 細胞單層研究胜肽之傳送途徑與肽酶水解之影響。酪蛋白經過三次酵素處理後凍乾,水解物回溶後進行膠體過濾,得到劃分物 F1(1600-1300 Da)、F2(1000-500 Da)和 F3(<500 Da)。利用不同運輸抑制劑 Gly-Sar、cytochalasin D 和 wortmannin 來評估運輸途徑,結果顯示,F1 和 F2 的運輸途徑是細胞間隙途徑(paracellular route),而 F3 的運輸是走 PepT1 途徑。刷狀緣肽酶(brush border peptidases, BBPs)是 PepT1 運輸中涉及的主要肽酶,而細胞間隙途徑則是除了 BBPs 外,還有其他肽酶參與。接著觀察玉米麩質衍生之胜肽 YFCLT和 GLLLPH,均能以完整形式穿越 Caco-2 單層,然而,此二胜肽易被 BBPs 水解;預處理二肽基肽酶 IV(dipeptidyl peptidase IV, DPPIV)抑制劑 diprotin A,可減少YFCLT 和 GLLLPH 水解,其滲透性顯著增加。接著,利用 sodium azide、Gly-Sar、cytochalasin D 和 wortmannin 來觀察運輸途徑,結果顯示,細胞間隙途徑和轉胞吞作用(transcytosis)參與此 5 胜肽和 6 胜肽轉運。LSW 也可以完整通過 Caco-2 單層,利用 cytochalasin D、wortmannin、theaflavin-3′-O-gallate (TF3′G)和 siRNA 來評估運輸途徑,結果顯示,LSW 運輸途徑為 PepT1 和細胞間隙途徑,並且對頂端的肽酶有抗性。綜合上述,分子量介於 1600-500 Da 酪蛋白衍生肽的運輸途徑為細胞間隙途徑、小於 500 Da 酪蛋白衍生肽則為 PepT1、LSW 為 PepT1 和細胞間隙途徑、5-6 胜肽為細胞間隙途徑和轉胞吞作用。在跨膜運輸的過程中,LSW 由細胞內肽酶水解,其他胜肽降解則由 BBPs 負責。
專題討論20191030_摘要_劉昕.pdf