探討不同來源之酵素生產松二糖

學生姓名: 郭秝瑜
指導教授: 方翠筠
學期: 110上
摘　　要: 松二糖 (turanose)為存在於蜂蜜中的稀有糖類，是蔗糖異構物。是一種具有預防齲齒、代謝紊亂等作用的低熱量甜味劑，現階段主要由澱粉蔗糖酶 (amylosucrase, AS)來生產松二糖，澱粉蔗糖酶屬於糖苷水解酶家族，以蔗糖作為基質，催化聚合及極異構化反應。本篇目的為探討不同來源之酵素生產松二糖。來自 Neisseria polysaccharea 的 AS基因 (NpAS) 及經突變得到的 NpAS G396S 分別轉形至大腸桿菌後，純化得到目標蛋白，並分析其最適作用條件，並生產松二糖，結果顯示，NpAS 和 G396S 在 30°C、pH7，濃度為 0.8 U/mL 時，產量分別為 50.9% 和 60.59%，且添加 0. 5M 果糖有助於提高松二糖的產量。來自 Neisseria subflava 的 AS 基因 (NsAS)轉形至大腸桿菌中，使用鎳離子親和性管柱得到目標蛋白後，測定酵素活性、最適作用條件及生產松二糖，結果表明， NsAS 之比活性為 2.78 U/mg，最適作用條件為 pH 8、45°C，使用 1 M 蔗糖產量達最高為 29%。而來自 Bifidobacterium thermophilum 的 AS 基因 (BtAS)轉形至大腸桿菌後，透過鎳親離子親和性管柱純化，對目標蛋白進行特性探討及生產松二糖，結果顯示，在 pH 6, 50°C 時有最佳的活性，在 55°C 下生產松二糖其產率最高，發現生產過程對於果糖濃度是具有依賴性的。綜上所述，以不同來源之酵素生產松二糖，並配合其最適作用條件，對於其生產是具有極大的潛力。