探討不同來源海藻糖合成酶之特性並用於生產海藻糖

學生姓名: 王映菩
指導教授: 方翠筠
學期: 111上
摘　　要: 海藻糖是一種非還原性二糖，味道溫和、水溶性佳、在低 pH 值下穩定、吸濕性低、玻璃化轉化溫度高還具有保護蛋白質的能力，且為公認安全 （GRAS） 食品。此外，海藻糖特殊的鍵結方式使其可以在高溫和酸性條件下穩定而具有廣泛的工業應用。本篇目的為探討不同來源海藻糖合成酶之特性並用於生產海藻糖。來自 Pseudomonas putida ATCC47054 的海藻糖合成酶轉形至大腸桿菌後，純化得到目標蛋白，分析其最適作用條件與生產海藻糖，結果顯示，以 30 % 麥芽糖作為基質，於最適作用條件 50 °C、pH 7.5-8.0 反應 24 小時後，可獲得 64.3 % 的轉化率，並透過五段連續色譜分離系統將海藻糖從海藻糖合成酶生成產物中分離，達到 95 % 的純度。來自 Acidiplasma sp. MBA18 1 的海藻糖合成酶轉形至大腸桿菌後，純化得到目標蛋白，探討其最適作用條件並生產海藻糖，最適條件為 pH 6.5、40 °C，與 1 % 麥芽糖反應 9 小時後，海藻糖的轉化率約為 43.62 %。源自 Thermus antranikianii 的海藻糖合成酶 TaTS 轉形至大腸桿菌後， 以鎳離子親和性管住純化，對目標蛋白進行特性探討及生產海藻糖，結果顯示，在 pH 7, 60°C 時有最佳的活性，在 30 °C 下反應可以獲得 76.8 % 的海藻糖轉化率。綜上所
述，三種來源的海藻糖合成酶於最適作用條件下反應，均能達到相當的海藻醣產率，且利用五段連續色譜分離系統能獲得更高純度的海藻糖，提升海藻糖合成酶發展潛力。