探討由大腸桿菌表現之重組分子量標準蛋白的最適製備及染色條件
學生姓名:
張浩秦
指導教授:
方翠筠
學期:
109下
摘 要:
十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳 (SDS-PAGE) 在分子生物學研究領域上是一個應用廣泛且方便的技術。若欲於 SDS-PAGE 電泳中確認蛋白質之分子量需藉由對照分子量標準蛋白 (protein ladder) 來達成。本研究透過 PIPE cloning 基因重組技術建構大分子量之重組蛋白基因 TreA-PGD，並於 Escherichia coli BL21CodonPlus (DE3) - RIL 菌株中誘導及表現，再透過親合性及分子篩管柱純化目標
蛋白，藉此大量生產高純度且低成本之分子量標準蛋白。另外表現過程中以發酵槽進行培養並結合高密度細胞培養策略，使用以甘油為主要碳源之饋料，藉由 pH19 stat 的方式進行控制添加，結果顯示目標蛋白於饋料 24 小時後產量達到 436 mg/L。 將所生產之分子量標準蛋白以 Remazol 染劑進行染色，透過染劑上的乙烯碸基 (vinyl sulfone group) 與蛋白質上的胺基 (amine groups) 於鹼性環境中加熱使其反應，產生共價鍵結以達到著色之效果。綜合上述本研究結合各種蛋白質之最適製備及染色條件，最終製備出含紅綠藍三種顏色，11 個條帶，分子量介於 17-325 kDa間，且具商業發展潛力之彩色預染分子量標準蛋白試劑。
蛋白，藉此大量生產高純度且低成本之分子量標準蛋白。另外表現過程中以發酵槽進行培養並結合高密度細胞培養策略，使用以甘油為主要碳源之饋料，藉由 pH19 stat 的方式進行控制添加，結果顯示目標蛋白於饋料 24 小時後產量達到 436 mg/L。 將所生產之分子量標準蛋白以 Remazol 染劑進行染色，透過染劑上的乙烯碸基 (vinyl sulfone group) 與蛋白質上的胺基 (amine groups) 於鹼性環境中加熱使其反應，產生共價鍵結以達到著色之效果。綜合上述本研究結合各種蛋白質之最適製備及染色條件，最終製備出含紅綠藍三種顏色，11 個條帶，分子量介於 17-325 kDa間，且具商業發展潛力之彩色預染分子量標準蛋白試劑。
1092_摘要_張浩秦.pdf