綠豆蛋白水解物中活性胜肽的分離及鑑定與其生理活性之探討
學生姓名:
林楚娣
指導教授:
張祐維
學期:
110下
摘 要:
綠豆 (Vigna radiata L.) 是世界各地重要的豆科作物，富含維生素、礦物質、蛋白質等營養物質。綠豆蛋白質透過酶水解能產生具有生理活性的胜肽，因此本研究欲探討以不同酶進行水解之綠豆蛋白水解物 (Mung bean protein hydrolysate, MPH) 中活性胜肽的分離及鑑定方法，與其生理活性。以 Bromelain 水解之 MPH 經超過濾 (Ultrafiltration, UF) 及逆相高效液相層析 (Reversed phase high performance liquid chromatography, RP-HPLC) 分離，並以串聯式質譜儀 (Tandem mass spectrometry, MS/MS) 進行胺基酸序列鑑定，合成了五個肽序列 (LPRL、YADLVE、LRLESF、PGSGCAGTDL 及HLNVVHEN) 並分析血管收縮素轉換酶 (Angiotensin converting enzyme, ACE) 和腎素抑制活性，且以自發性高血壓大鼠 (Spontaneously hypertensive rats, SHR) 為模型，研究 MPH 和合成肽口服給藥後的降血壓能力。以 Alcalase 水解之 MPH 經 UF 分離後，測定了 α,α-diphenyl-β-picrylhydrazyl (DPPH) 自由基清除能力、羥基自由基清除能力 (Hydroxyl radical scavenging activity)、Fe2+ 螯合活性、O2- 清除活性、還原能力 (Reducing power) 及 ACE 抑制活性。分析了以 Papain 水解之 MPH 對小鼠H22 腫瘤 (Mouse hepatocarcinoma cells) 以及人肝癌細胞 (HepG2) 的抑制作用，結果顯示抑制率皆會隨著 MPH 濃度上升而提高。以凝膠過濾層析 (Gel filtration chromatography, GFC) 及 超高壓液相層析串聯質譜儀 (Ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, UPLC-MS/MS) 進行肽段的分離與鑑定，產生了四個肽片段分別命名為 VEG、PQG、LAF 及 EGA，分析其中胺基酸種類與抑制 HepG2 細胞增殖的相關性。綜上所述，以不同酶水解之 MPH 會分別產生具有抗高血壓、抗氧化以及抗肝癌細胞增殖活性之胜肽，在功能性食品或藥物中具有潛在的應用價值。
111.03.30_專題討論書面報告_林楚娣.pdf