從米酒醩中分離與鑑定抗氧化及血管收縮素轉換酶抑制活性胜肽之研究
學生姓名:
何湘晴
指導教授:
張祐維
學 期:
114上
摘 要:
由於現代人的飲食習慣及生活方式改變，人們面臨了越來越多的健康問題。生物活性胜肽的發現與研究，為疾病治療及維持健康提供了新的思路與方向。在本篇文章中，我們在釀造米酒的副產物米酒醩中分離出了兩種胜肽，分別是具抑制血管收縮素轉換酶 (angiotensin-I converting enzyme, ACE, EC 3.4.15.1) 及抗氧化胜肽，並對其進行鑑定及活性評估。在第一篇文章中米酒醩經過三步驟的反相高效層析儀 (RP19 HPLC) 分離後，首次成功分離及鑑定出兩條新型胜肽分別 LIIPQH 與 LIIPEH。兩者均顯示出顯著的 ACE 抑制活性，其 IC₅₀ 分別為 120.10 ± 9.31 µg/mL 與 60.49 ± 5.78 µg/mL。進一步酵素動力學分析顯示，這兩條胜肽屬於混合型 ACE 抑制劑，並且在體外消化過程中對 ACE 與腸道酵素均具有良好的穩定性。而在第二篇文章講述到米酒醩是利用酵素水解的方式製備抗氧化胜肽並進行其鑑定與活性評估。首先，對酶解條件進行單因子與最佳化分析，結果顯示鹼性蛋白酶為最適水解酵素。其最佳水解條件為：pH 10.5、溫度 45 °C、酵素添加量 5000 U/g、固液比 20 mg/mL。
所得水解產物經 Sephadex G-15 凝膠層析純化後，以液相層析–串聯質譜 (LC– MS/MS) 進行肽段序列鑑定。所得胜肽序列再經 BIOPEP 資料庫、PepDraw 軟體及分子對接分析，篩選出三條具有抗氧化潛力的胜肽，分別為 ALPHAIL、EWAPGAH及 FDDLYFDR。隨後以固相合成法合成上述三條胜肽，並測定其抗氧化活性。結果顯示，三者皆具有優異的抗氧化能力。為進一步探討其是否具其他潛在生理活性，研究亦針對 ACE 進行分子對接分析。結果發現，ALPHAIL 與 tACE 具有良好的結合親和力，推測其可能具有 ACE 抑制活性，但仍需透過實驗驗證其具體功能。綜上所述，米酒醩作為釀造的副產物，具有開發為功能性食品的原料以及抗高血壓保健成分的潛在價值。
所得水解產物經 Sephadex G-15 凝膠層析純化後，以液相層析–串聯質譜 (LC– MS/MS) 進行肽段序列鑑定。所得胜肽序列再經 BIOPEP 資料庫、PepDraw 軟體及分子對接分析，篩選出三條具有抗氧化潛力的胜肽，分別為 ALPHAIL、EWAPGAH及 FDDLYFDR。隨後以固相合成法合成上述三條胜肽，並測定其抗氧化活性。結果顯示，三者皆具有優異的抗氧化能力。為進一步探討其是否具其他潛在生理活性，研究亦針對 ACE 進行分子對接分析。結果發現，ALPHAIL 與 tACE 具有良好的結合親和力，推測其可能具有 ACE 抑制活性，但仍需透過實驗驗證其具體功能。綜上所述，米酒醩作為釀造的副產物，具有開發為功能性食品的原料以及抗高血壓保健成分的潛在價值。
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