提昇在大腸桿菌表現及胞外分泌木聚糖酶之可溶蛋白量
學生姓名:
李旭傑
指導教授:
方翠筠
學 號:
10432043
學期:
105上
摘 要:
大腸桿菌因易於操作、生長快速及產物量高的特點使大腸桿菌成為優異的表現宿主用來生產重組蛋白，然而並非所有的基因都適合在大腸桿菌中表現，有些蛋白質存在轉譯後修飾的問題，若沒辦法形成糖基化或雙硫鍵，多肽鏈會形成無活性的偏光聚集體蛋白，稱為內含體 (inclusion bodies, IBs)，可透過改變誘導溫度、培養基組成、pH、與伴護蛋白或特定蛋白共表現等改善。降低誘導溫度與誘導物濃度可增加可溶性木聚醣酶的產率。當木聚醣酶與伴護蛋白 DnaKJE 共表現，可溶性木聚醣酶佔總蛋白量的 40% 。將木聚醣酶基因 (xynA) 融合高滲透誘導周質蛋白基因 (OsmY) 並表現，發現大腸桿菌含有 pET-OsmY-xynA 表現出的活性是 pET-20b-xynA 的 24 倍。最後希望能提昇大腸桿菌將酵素分泌至胞外的量以增加工業生產價值並減少純化成本，當與角質酶 (cutinase) 共表現時，培養時間減少一半且產率增加 7.9 倍。
李旭傑3.pdf