不同蛋白酶水解蝦殼廢棄物活性胜肽與生理活性之探討
學生姓名:
王怡文
指導教授:
蔡國珍
學 號:
10832020
學期:
108下
摘 要:
本篇研究目的為使用不同蛋白酶水解蝦殼廢棄物,並分析其生理活性與血管收縮素I轉化酶 (Angiotensin I-converting enzyme, ACE) 之抑制活性。蝦殼廢棄物分別先以Chymotrypsin (Ctryp)、Pepsin (Pep)、Trypsin (Tryp) 分解蛋白質,再以 Alcalase (AL)水解 (Shrimp shell discards protein hydrolysis, SPH) 之組別,無前處理組別分別以AL、Ctryp、Pep、Tryp 水解 (Raw shrimp shell discard hydrolysis, RSH)。結果顯示,無論 SPH 或 RSH 皆具有抗氧化能力。在 ACE 抑制活性中以 Tryp + AL 水解之SPH 與 Tryp 水解之 RSH 效果最好,IC50 分別為 4.9 mg/mL、7.1 mg/mL;分析胺基酸序列得 Tryp + AL 水解之 SPH 含有 Pro-Pro 序列、Tryp 水解之 RSH 含有Ala-Pro 序列。以 Alcalase、Papain、Trypsin、Protamex 及 Flavourzyme 五種蛋白酶水解蝦殼廢棄物。結果顯示,抗氧化活性與 ACE 抑制活性以 Protemax 水解產物效果較佳,ACE 抑制活性 IC50 為 0.08 mg/mL;進而以超過濾將 Protemax 水解產物區分成 < 3 kDa、3-10 kDa、> 10 kDa,以 3-10 kDa、> 10 kDa 之 ACE 抑制活性較佳,IC50 約為 0.03 mg/mL。以 Savinase 水解蝦殼廢棄物,分成 SWPH5、SWPH15、SWPH40 (Shrimp waste protein hydrolysis, SWPH) 三組。結果顯示, ACE 抑制活性以SWPH15 最佳,IC50 為 2.17 mg/mL,以膠體過濾層析得到 ACE 抑制活性較佳之 F1片段,IC50 約為 3.5 mg/mL;以 Reversed-phase HPLC 區分得到 ACE 抑制活性較佳之 P8 次片段,IC50 約為 0.083 mg/mL;使用質譜法 P8 之胺基酸序列,以 Autodock Vina software 模擬分子對接,預期胜肽完整進入催化腔 (Catalytic cavity),推測可能有抑制 ACE 活性之能力。綜合上述結果,以特定蛋白酶水解蝦殼廢棄物皆展現 ACE抑制活性,其抑制活性可能與胜肽大小、胺基酸組成及作用活性位點有關。未來可用於開發降血壓之保健食品,但仍需經動物實驗測試。
專題討論_20200318_王怡文--摘要.pdf